Q. codon plus cell line의 역할은 무엇인가요?
안녕하세요 codon plus cell line은 코돈 편향을 줄이도록 설계된 codon plus cell들을 말합니다.codon plus cell 이란 우리가 대장균에게 특정 단백질을 만들도록 하기위해 여러가지 유전자를 집어 넣을 때, 코돈 편향이 발생하여 해당 단백질의 생산량이 떨어지거나 변형된 단백질이 생산될 수 있습니다.코돈이란 DNA의 트리플렛코드를 mRAN로 전사하여 RNA에 전사된 뉴클레오티드로 조합된 아미노산 코드입니다.트리플렛 코드란 아미노산 하나를 ATCG중 3개를 조합해서 설정한 유전자의 정보기록방식인데요.mRNA는 DNA의 트리플렛 코드를 대응되는 방식으로 가져옵니다.RNA의 코돈은 트리플렛 코드와 마찬가지로 염기서열3개가 하나의 아미노산을 지정하는데, 예를 들어 프롤린은 (CCU, CCC,CCA,CCG)의 서열이 지정합니다.여기에 상보적인 tRNA가 아미노산을 끌고와 mRNA에 붙으면서 단백질이 합성되는데, 대장균같은 세균에서는 특정 서열의 tRNA가 부족합니다.이는 코돈 편향 때문인데, 단백질 합성의 효율화를 위해 주로 사용하는 아미노산에 대한 tRNA가 만들어집니다.대장균도 코돈편향이 인간이 생성하는 단백질 유전자를 삽입하여도 맞는 tRNA가 부족해서 단백질의 합성이 잘 이루어지지 않는 경우가 있습니다.이런 점을 보안하기위해 특별하게 만들어진 대장균(특정 tRNA를 많이 만들게 된 대장균) 세포들이 codon plus cell이라고 할 수있습니다.대장균에 플라스미드를 삽입할 때 전기파열이나 열충격을 가해서 플라스미드를 삽입하는 것이 많이 사용되는 방법입니다.열충격을 가하고 삽입하려는 플라스미드가 들어있는 용액에 대장균을 넣고 회복시킨 후 배양합니다.플라스미드가 들어있는 용액에 두종류의 플라스미드를 넣으면 랜덤하게 대장균에게 삽입됩니다.플라스미드가 삽입안된 대장균/ 둘중하나만 삽입된 대장균/ 둘 다 삽입된 대장균플라스미드에는 특정 항생제 내성 유전자도 함께 삽입되어 있기 때문에 항생제를 처리했을 때 살아남는 대장균이 플라스미드가 삽입된 대장균으로 볼 수 있습니다.다만 플라스미드를 여러개 삽입한 경우 경우에 따라 하나를 대장균이 스스로 제거할 수도 있습니다.