학문
HPLC 이동상 용매에 대해 질문 있습니다.
HPLC 펌프 유속을 세팅한뒤 이동상 용매가 잘 흘러가고 있는지 눈으로 어떻게 확인 할 수 있나요? 컬럼이 연결되어있을때는 펌프의 투명한 튜브 부분을 보면 되는건가요? 컬럼이 분리 되었을 경우에도 어떻게 눈으로 확인 할 수 있을지 궁금해요
2개의 답변이 있어요!
안녕하세요, 검소한후루티88님. 이중철 전문가입니다.
먼저, 고성능 액체 크로마토그래피인 HPLC에서 이동상은 기포 없는 투명한 액체여서 투명 튜브만으로는 흐름을 볼 수 없으므로, 컬럼 연결 시에는 폐액 라인의 액적과 시스템 압력을 확인하고 컬럼 분리 시에는 연결 튜브 끝에서 떨어지는 방울이나 메스실린더를 통해 육안으로 유속을 직접 검증한답니다.
■ 투명 튜브 관찰의 한계와 컬럼 연결 시 확인 방법
질문자님께서 생각하신 것과 달리 펌프에 연결된 반투명 테플론 튜브만 쳐다봐서는 용매가 흐르는지 눈으로 알 수 없습니다. 이동상 용매는 탈기 장치를 거쳐 공기 방울이 완전히 제거된 맑고 균질한 상태로 관 내부를 빈틈없이 채워 흐르기 때문인데요. 만약 튜브 안에서 움직임이 보인다면 그것은 용매가 잘 흐르는 것이 아니라 압력을 떨어뜨리는 치명적인 기포가 유입된 비정상 상태입니다. 따라서 컬럼이 연결되어 있을 때 눈으로 흐름을 확인하려면 가장 마지막 단계인 검출기 뒤쪽의 폐액 튜브 끝단을 폐액통 밖으로 살짝 들어 올려 용매가 일정한 간격으로 똑똑 떨어지는지 직접 보아야 합니다. 동시에 모니터나 기기 화면에 표시되는 시스템 배압이 설정 유속에 맞게 수십에서 수백 바로 일정하게 유지되는지 함께 확인하면 누수 없이 잘 흐르고 있음을 확신할 수 있답니다.
■ 컬럼 분리 시 육안 확인 및 정밀 유속 측정법
컬럼을 분리해 놓은 상태라면 용매가 나오는 출구가 열려 있어 눈으로 확인하기가 훨씬 수월합니다. 컬럼 앞단에 연결되던 가느다란 피크 튜브나 스테인리스 관의 끝부분을 작은 비커에 대고 펌프를 가동하면, 관 끝에서 용매가 방울져 맺히거나 가늘게 흘러나오는 모습을 즉각 눈으로 볼 수 있는데요. 보통 분당 1밀리리터 유속으로 설정하면 관 끝에서 약 1초에서 2초마다 한 방울씩 규칙적으로 떨어집니다. 여기에 작은 메스실린더와 초시계를 준비해 1분 동안 받아진 용매의 부피가 설정한 유속 수치와 정확히 일치하는지 눈금으로 재어보면, 펌프 체크밸브의 고장 여부와 실제 유량 정확도까지 실무적으로 완벽하게 검증할 수 있답니다.
정리하자면,
기포 없는 이동상은 투명 튜브만 봐서는 흐름을 알 수 없으므로 컬럼 장착 시에는 최종 폐액 관 끝에서 떨어지는 방울과 배압 수치를 확인해야 하며, 컬럼 분리 시에는 열린 연결 관 끝에서 맺혀 떨어지는 용매 방울을 직접 보거나 메스실린더에 일정 시간 받아 부피를 측정함으로써 유속을 정확히 확인할 수 있습니다.
※ 질문자님을 포함하여 소중한 분들의 건강, 재산과 안전을 지키고, 혹시나 발생할 수 있을 다양한 문제 상황에 놓이지 않기 위해서라도 저를 포함하여 다양한 토픽에서 활동하는 모든 전문가분들의 아하 지식커뮤니티에서의 답변은 예외 없이 참고 용도로만 유용하게 활용하시기 바랍니다.😉
안녕하세요. 김찬우 전문가입니다.
HPLC 시스템상 이동상 용매는 무색투명하고 미세한 관을 통해 흐르기 때문에 눈으로 보는 것만으로는 흐름을 확인하기가 어렵습니다. 흐르는 속도가 빠르고 기포가 없으면 멈춰 있는 것 처럼 보이기 때문입니다.
컬럼이 연결되었을 때는 기기 화면의 시스템 압력이 정삭적으로 뜨는지와 폐액통으로 용매가 잘 떨어지는지로 확인을 보통 하게 됩니다.
컬럼이 분리되었을 때는 탈거된 튜브 끝단에서 용매가 방출져 흘러나오는지 직접 눈으로 확인 할 수 있습니다.
정확한 흐름 검증이 필요할 때는 스톱워치와 메스실린더로 일정 시간 동안 모인 용매의 부피를 측정하는 것으로 확인을 할 수 있습니다.
그럼 답변 읽어주셔서 감사드립니다:)