학문
Mini prep 결과는 어떻게 확인하나요?
mini prep을 배웠는데요, mini prep 후 dna 양을 정량하고 sequencing 의뢰 보냈습니다 . 시퀀스 결과물을 보고 미니프렙 성공여부를
판단할수 있는건가요?
1개의 답변이 있어요!
안녕하세요. 서종현 전문가입니다.
mini prep 결과 확인 방법은 다음과 같습니다.
DNA 양과 순도 측정 : mini prep 후 추출한 DNA를 나노드롭(nanodrop)과 같은 장비로 정량하고 260/280 비율로 순도를 확인합니다. 순도 값이 1.8~2.0 범위일때 성공적인 추출로 볼 수 있습니다.
겔 전기 영동 확인 : 추출한 플라스미드 DNA를 아가로스 겔에서 전기영동해 supercoiled 상태의 플라스미드 벤드가 잘 나타나는지 확인합니다.
시퀀싱 결과 분석 : 시퀀싱 결과가 기대한 플라스미드 벡터 및 삽입 유전자와 일치하면 mini prep이 성공했음을 의미합니다. 시퀀스 염기들이 깨끗하고 불필요한 잡음이 적어야 하며, 예상 위치와 방향이 맞는지 확인해야 합니다. 즉, 시퀀싱 결과는 mini prep 성공 여부 판단에 중요한 근거가 되지만, DNA 농도와 겔 확인도 병행해야 정확합니다.