Dh5a cell line 에는 lac operon이 없나요?
Dh5a는 iptg induction을 이용한 protein expression이 어렵다고 하던데 그 이유가 lac operon이 없어서 인가요? 아니라면 이유는 무엇인가요!
DH5α 세포주는 대장균의 변형된 형태입니다. 유전자 클로닝 및 DNA 조작 작업에 흔히 사용됩니다. 이 세포주는 lac operon을 포함하고 있긴 하지만 특정한 변형이 있어 IPTG(indole-3-propionic acid) 유도에 의한 단백질 발현에 제한이 있을 수 있습니다.
Dh5a 에는 lac 오페론이 있기 때문에 IPTG 유도체 발현 시스템이 작동할 수 있습니다.
Dh5α 균주는 대장 유전자형 E.coli 균주입니다. 따라서 Dh5α는 lacI, lacA, lacY, lacZ 등 lac operator를 가지고 있으며, 이것이 IPTG 유도체 발현 시스템의 기본입니다. IPTG는 유전체에 있는 lacI 유전자로부터 생성되는 lactose metabolic phenotype의 산화 활성체를 방해하여 수록 완화할 수 있는 유일한 기능물질입니다.
Dh5α는 다른 대장 균주와는 다르게 lacZ 유전자의 오퍼터를 갖고 있으므로 상대적으로 항상 높은 lactoperoxidase 효과를 가지고 있어 청녹색 섭환인증을 해줄 수 있습니다. 하지만 상업적으로는 이러한 조건을 이용하지 않습니다. 따라서 Dh5α는 Dh5α가 자기 잇동을 강할 수 있는 사실을 상기할 수 있습니다.
E.coli competent cell 중에서 DH5α cell line도 lac operon을 가지고 있기 때문에 protein expression에 사용하셔도 되지만 일반적으로는 DH5α는 plasmid transformation에 주로 활용하고, BL21 cell line을 protein expression에 주로 활용합니다.